限于篇幅，本文只探讨3个议题，对其它相关问题感兴趣的读者请阅文末的参考文献 。
将ELISA要领转移到其它剖析平台
在开发临床前LBA剖析要领时，ELISA可能是首选的要领，因其简朴性，低本钱，并且不需要专门的仪器装备 。可是，若是ELISA要领不可知足迅速度和稳健性要求时，特殊是对GLP毒理/毒代研究而言，需要在一个CRO实验该研究时，往往需要将一个ELISA要领转移到MSD或者GYROS平台至上实验 。
MSD
从ELISA转移到MSD平台相对简朴；当使用特定抗体对的ELISA要领无法抵达所需要的迅速度时，会经常实验这样的转移来镌汰基质效应，提高迅速度或增添定量动态规模 。然而，就像其它要领转移一样，试剂的差别和差别的修饰（modifications），如ruthenium或生物素标记，可能会影响要领的效能 。因此，虽然可以在MSD上重新使用已有的抗体对和测试名堂，但将需要调解校准品（Cs）和QCs的浓度，并充分验证新的要领 。
Gyrolab
在理想的情形下，需要小体积样本或半自动化的剖析要领应当直接在Gyrolab平台上开发 。若是一对抗体（antibody pair）可用于相同的捕获-检测组合，则将ELISA要领直接乐成地转移到Gyrolab上的可能性更大； 只管可能需要重新优化，以提高迅速度和/或扩展动态规模 。 重新优化包括测试抗体对的组合；调解抗体浓度，以最大化迅速度和动态规模；测试选择性，以只管镌汰MRD；以及重修动态规模和QC水平 。在转移要领到Gyrolab平台的时间，修改试剂，如使用生物素（biotin）或荧光标记，也会影响测定性能 。在任何情形下，都需要在此平台实验完全的要领验证 。
BIAcore
BIAcore和ELISA之间的差别太大，不可直接转移剖析要领；因此，需要举行要领的再开发，和周全的要领验证 。 由于BIAcore是一个基于流体的系统，因此不宜直接与基于固相（例如，微孔板）的免疫测试要领举行较量 。需要进一步开发BIAcore要领，例如芯片的牢靠（immobilization）和再生条件，用于牢靠和再生缓冲液的试剂，试剂的稳固性，确定标准品和质量控制样品，以及配体团结测试（LBA）要领的其他方面 。
Luminex
若是以Luminex名堂定量单个待测物，则从ELISA名堂的要领转移在测试要领的结构方面很是简朴，只管需要制备，评估和验证新的试剂（例如，dye-coated beads，荧光标记的检测抗体） 。有时，在洗涤办法中需要特另外微孔板（真空或磁珠板） 。若是需要将多个ELISA要领组合并转移到一个Luminex要领（由于其multiplexing功效），则需要举行特另外研究；并且，优化要领参数可能需要更多的要领开发时间 。总体而言，必需周全验证单通路和multiplex名堂的Luminex要领；ELISA要领中使用的条件有助于确定开发Luminex要领的名堂和抗体对 。
剖析大数目样本和仪器故障
MSD
关于在MSD上的样天职析，校准品（Cs）和QCs的位置通常与ELISA的位置相同 。另一方面，值得注重的是：对微孔板一次只读取四个孔的数据，并且在施加电压后只能读取一次 。因此，若是爆发仪器故障，可能无法测定整个校准曲线；或者取决于微孔板设置（plate set-up），可能缺少一组QC的一部分，这通常爆发在水平设置（horizontal set-up）中 。关于笔直设置（vertical set-up），更有可能获得校准品和第1组QC，而不是第二组QC 。在这两种情形下，将需要重新读取整个微孔板 。若是仪器爆发故障，并且读数缓冲液已添加到微孔板中，则可能需要重新剖析（re-assay）样品，由于检测信号会随时间显著地镌汰 。
Gyrolab
通常，一个剖析运行被界说为一个CD，在每个CD上都安排有校准品和 QCs 。若是安排在差别CDs上的QCs的细密度和误差切合接受标准，则在无人值守的运行中处置惩罚的最多五张CDs的系列可以界说为一个单次运行 。 这需要测试和评估一个给定的名堂是否知足上述接受标准，由于这取决于能否快速捕获待测物的和试剂的稳固性 。
需要将接受标准应用于每个CD，这意味着具有失败的QCs和/或失败校准曲线的CDs会被拒绝，而来自统一个多个CD运行中的其它CDs可以通过 。若是含多个CD的运行仅有一条标准曲线，并且此曲线不切合接受条件，则此多个CD的运行的所有数据将被拒绝 。由于多个CD运行的危害，故应在要领验证时，需要对样品剖析时的校准曲线和QCs设置举行评估 。在任何情形下，每个CD都必需含有QCs 。
若是在运行历程中嫌疑针头故障，例如，视察到结构之间（inter-structure）高的CVs，则需要使用供应商提供的仪器一样平常维护测试要领，测试液体处置惩罚装置的性能 。故可以识别不切合接受标准的样本，校准品或QCs所使用的针头，并可以在未来的运行中重新剖析 。液体处置惩罚装置有10个针头，剖析数据指明晰用于转移某一样本的针头 。
一些较新的LBA剖析平台，包括Gyrolab，提供比ELISA更宽泛的动态规模 。只管云云，仍建议使用相同数目的校准品和 QCs（在每个CD/微孔板的每个QC级别重复两次）举行验证（LLOQ，LQC，MQC，HQC，ULOQ）和样品剖析（LQC，MQC，HQC），犹如对ELISA要领建议的那样 。
Luminex
常见的做法是设置板中（in-plate）校准品，并重复（duplicate）剖析校准品和样本 。校准品的规模通常比 ELISA的规模更宽，以顺应种种待测物浓度，并确定每个待测物的校准曲线和QCs响应 。值得指出，关于另一种待测物，校准曲线上的锚定点可能纷歧样 。
若是仪器在运行中失败（即，爆发一个部分运行partial run），只要相关校准品和QCs乐成完成且可以接受，则仍然可以使用已剖析样本的数据 。与某些顺序测定平台（sequential platforms）相比，这不太令人担心；而在那些顺序平台上，只有有限的QCs位于相对较大宗的样本之间；这样的话，就可能没有足够的QCs来判断许多样天职析的效果是否有用 。
BIAcore
该平台与RIA一样，系列式地（in series）剖析样品，并使用微孔板加载样本 。因此，有两种要领可以运行 BIAcore 样天职析 。与 ELISA一样，按96孔，设置校准品和QCs；或者将两个板（或更多）可以作为一个整体来运行：在最先时，剖析校准品，并且在整个样天职析中穿插几组QCs 。爆发部分运行效果的缘故原由，可能是由于仪器故障；也可能是由于未知缘故原由导致QC失败 。应凭证爆发的情形和时间处置惩罚仪器故障 。在由于未知缘故原由导致QC失败的情形下，当两组已接受的QCs之间的所有样本都需要重新剖析时，可以使用bracket approach，如表3所示 。
表3. Biacore样天职析设置
总体而言，若是40%或更多个QC失败，则必需重新剖析，在可接受的最后一组QC之后的，所有样本 。只有在运行最先时的一组QC都通过了的情形下，才华接受第一组样本的剖析效果 。若是QC的乐成和失败是零星的（sporadic），则整个样天职析运行失败，必需举行缘故原由视察 。RIA使用类似的要领，系列式地剖析一组试管 。
实验样天职析的最佳实践
1.在要领开发的历程中，最好消除残留（carry-over），而不是在样天职析中加以盘算校正 。
2.关于每个平台，应使用短期稳固性数据来确定每次运行的一连时间，以确保样本稳固性 。
3.一个剖析运行不限于96个数据点（校准品加样本）；例如，关于基于差别硬件支持，如CD和/或系列运行[run in series]，如RIA，BIAcore，Erenna®，和 Gyrolab的平台 。
4.在剖析运行最先时，首先剖析标（校）准曲线；之后，以合理的频率在运行中距离地剖析QCs，以验证该剖析平台上的效果 。取决于怎样界说一个剖析运行，可以在每个固体支持（solid support）上设置校准品，也可以设置在一个微孔板/CD上；之后是QCs距离的一系列样本 。无论一个剖析运行是怎样界说的，应当有纪律地多次剖析QCs，以确认运行内的细密度 。
5.只要在要领验证时代确定的%CV在可接受的规模内，例如，小于或即是现在能够接受的15%（对小分子而言），则可以举行单个样品剖析，并接纳最严酷的接受标准 。若是运行凌驾多个固体支持，则%CV标准指的是重复（duplicate）运行的QCs，和包括多个固体支持的运行内细密度 。
6.关于要领转移，在更改剖析要领的平台或名堂时，大大都平台需要重新验证；即即是部分验证也可能错过对一些要害参数的评估 。因此，建议对样天职析要领举行完整的重新验证 。
7.Multiplexing：建议尽可能在待测物的混淆物中，验证每一个待测物 。在样天职析时代，若是一个待测物的剖析失败，则应重新剖析所有样本，并屏障先前及格待测物的剖析效果 。
总结与前瞻
总之，大大都药物发明阶段的PK/PD免疫剖析可以在MSD或Gyrolab平台上举行 。Gyrolab还具有运行时间短，样本体积小和自动化，等附加优势，因此对临床宿世物剖析极具吸引力 。无论剖析平台怎样，本文强烈建议，在最终所需剖析要领的统一平台上，筛选试剂和评估要领的性能 。在另一方面，超高迅速度和multiplexing平台是特殊的应用平台，通常不可对试剂举行高通量筛选 。因此，可以首先在ELISA，MSD，Gyrolab或BIAcore（SPR手艺）平台上对试剂举行筛选，然后在相关特殊平台上优化并最终建设相关要领 。Simoa™平台因其超高迅速度（可以使用微量样本体积）和自动化操作，在相当的水平上可以替换Gyrolab平台，用于临床前PK样天职析 。
针对可溶性靶标的新药项目，需要在要领开发的最先，就使用BIAcore平台使用的SPR手艺来战胜耐受性（tolerance）问题 。选择剖析平台时，应当切记最终目的 。虽然获得完善的要领参数是最理想的，但就检测要领的局限性和项目需求而言，需要切合现实；因此，需要有愿意在使用的样本体积或剖析运行的时间，等参数上，做出妥协，以知足整体需求 。与项目团队优异的相同有助于确定相关事情的优先级别，知足对剖析要领的需求并知足相关时间表 。当项目的目的预期爆发转变时，需要对剖析要领的名堂坚持足够的无邪性，以便在差别的剖析平台之间，轻松地转移剖析要领 。
每个平台在检测试剂，如Sulfo-tag、horseradish peroxidase（HRP或其他酶）方面，差别最大 。因此，试剂的生物素化（biotinylation），当与各自对应的链球菌卵白标记的试剂（streptavidin-tagged reagents）一起使用时，可以实现剖析要领在这些平台之间的无缝转移 。在需要将捕获试剂生物素化的平台（Gyrolab）上，这些生物素化的试剂可以作为捕获（capture）使用 。无论是剖析针对可溶性靶标的药物的游离的，照旧团结的百分比，或是剖析重大分子的分子完整性，都应当使用免疫测试要领的多功效性（versatility），并响应地思量合适的剖析平台 。虽然免疫剖析领域正在迅速生长，但LC-MS等正交性生物剖析平台也在平行地生长，有时可以作为免疫剖析要领的增补 。因此，充分相识正交剖析平台，并实时向这些平台的团队提醒研究偏向，将有助于项目的乐成 。后续文章将先容相关希望，敬请关注 。
特殊声明
本文若有疏漏和误读相关指南和数据的地方，请读者谈论和指正 。所有引用的原始信息和资料均来自已经揭晓学术期刊、官方网络报道等果真渠道, 不涉及任何保密信息 。 参考文献的选择思量到多样化但也不可能完整 �＝哟琳咛峁┯屑壑档奈南准捌淦拦� 。
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